Con Nanolive si può studiare l’intero processo senza perdere dettagli.
Le spore fungine rappresentano la principale forma di disseminazione e sopravvivenza dei funghi. Si tratta di cellule altamente resistenti, capaci di persistere in condizioni ambientali sfavorevoli e di germinare quando temperatura, umidità e nutrienti diventano adeguati.
La germinazione è un processo complesso che inizia con l’idratazione della spora e la riattivazione del metabolismo, seguita dalla formazione di una protrusione chiamata tubo germinativo. Da questo primordio si svilupperanno successivamente le ife che compongono il micelio.
Lo studio della germinazione richiede tecniche in grado di monitorare cambiamenti morfologici rapidi e sottili nella cellula fungina, preferibilmente senza marcatori che possano alterarne il comportamento. In questo contesto, l’olotomografia di Nanolive rappresenta uno strumento particolarmente efficace.
Nanolive è un microscopio olotomografico in grado di ottenere ricostruzioni tridimensionali label-free della cellula in tempo reale, sfruttando le variazioni dell’indice di rifrazione. Questa tecnologia consente di osservare strutture intracellulari, membrane e cambiamenti morfologici dinamici senza necessità di colorazioni o marcatori.
A riprova di quanto affermato, in figura 1 sono riportati vari frame di un video acquisito dal Dr. Matthias Steiger presso la Technical University di Vienna.
Il campione analizzato era costituito da spore di Trichoderma reesei, incubate a 30 °C e monitorate per oltre 2 ore con una frequenza di acquisizione di 5 minuti. L’esperimento ha permesso di visualizzare l’intero processo iniziale della germinazione, dal rigonfiamento della spora alla formazione del tubo germinativo.
Figura 1: Frame di un video olotomografico acquisito con Nanolive. La cellula fungina centrale si attiva e germina nel tempo. Nelle prime fasi, la spora mostra i tipici cambiamenti morfologici associati alla reidratazione e all’attivazione metabolica, mentre con il progredire dell’acquisizione, appare evidente la formazione del tubo germinativo. Il video completo è disponibile a questo link https://www.nanolive.com/applications/overview/microbiology-host-pathogen-interactions/.
La qualità delle ricostruzioni, basata esclusivamente su contrasto da indice di rifrazione, ha permesso osservare la rimodellazione della cellula fungina durante la transizione verso la crescita filamentosa, senza alterarla. Nanolive è infatti un sistema efficace per lo studio in tempo reale di organismi microscopici. Grazie alla sua tecnologia non invasiva, questo microscopio fornisce un quadro fisiologicamente più fedele rispetto a molte metodologie tradizionali.
